肝细胞癌(HCC)治疗除少部分患者适用于手术切除、肝动脉化疗栓塞、射频消融和肝移植等治疗外，大部分患者的疗效和预后均不理想，釉丛蛋白基因定位在1号常染色体长臂q21-31，编码蛋白为酸性、磷酸化糖蛋白。

　　新近分子肿瘤学研究发现，TUFT1在胰腺、乳腺、甲状腺及肺部肿瘤进展时异常表达，并与多种信号通路的活化密切相关，有关TUFT1与肝细胞恶性转化及肝癌进展关系及其分子机制，尚未报道，本研究主要检测了HBV相关HCC患者术后癌及癌旁组TUFT1的表达情况，分析其病理特征及其预后判别的临床价值。

  资料与方法  

　　1、生物信息学分析：肿瘤相关TCGA数据库对肿瘤组织与正常组织样本间的基因差异表达进行分析，使用GEPIA数据库确认TUFT1在肝癌组织表达量，|log2FC|>1.0和P<0.05被用来确定肝癌TUFT1表达水平。

　　基于全球最大的癌基因芯片数据库中的相关信息资源，分析肝癌组及正常肝组TUFT1 mRNA表达情况，P<0.05被认为差异具有统计学意义。

　　2、组织与资料收集：患者入选条件：术前未经任何放化疗和手术治疗，无介入治疗禁忌症，未合并其他恶性肿瘤及严重内科疾病，一般状况良好，收集临床信息比如年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期(WHO标准)、肿瘤数目、肝内转移、肿瘤包膜完整、淋巴结转移、HBV感染、甲胎蛋白表达、肝纤维化、门静脉侵犯等。

　　3、治疗方法：所有患者均经HCC组织病理学证实，术前未接受化疗或放疗，病理完整，对患者进行随访，记录生存和复发相关信息，并经医院伦理委员会审核批准，患者行根治性手术切除，手术切缘>2.0cm，癌及癌旁(距癌组织>3.0cm)标本经手术切除后，立即用等渗盐水洗净，然后置液氮保存。

　　4、组织芯片制作：收集132份HCC病例及癌灶、癌旁组织蜡块，根据苏木精-伊红染色法切片对石蜡标本中代表点标记，用TMA制作机细针打孔法，从癌中或癌旁组织蜡块采集圆柱形组织，整齐排列制成TMA蜡块，每张常规载玻片上放66个样本，孔径1.5mm，每个组织芯间距为0.2mm。

　　5、免疫组织学方法：石蜡切片常规脱蜡，浸泡在柠檬酸钠缓冲液中，95~100℃抗原修复20min，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，每次5min，3%H2O2
避光孵育15min，PBS洗3次，每次5min，室温下免疫染色封闭液孵育1小时。

　　6、结果判定：根据着色的深浅进行评分：TUFT1阴性，细胞不着色记0分，弱阳性，细胞呈淡黄色记一分，阳性，细胞呈棕黄色记2分，强阳性，细胞呈深棕黄色记3分。

　　据TUFT1高/低表达的临界值中位数将样本分为高和低/不表达两组，标志物敏感性评价：2~3分为阳性，0~1分为阴性，每个得分=强度分乘阳性细胞百分比，总分在0~300。

　　7、统计学方法：用SPSS 25.0软件数据处理，比较肝癌组织及癌旁组织TUFT1高表达和TUFT1低/不表达情况，组内用Wilcoxon
non-parametric signed-rank 检验进行分析。

　　组件用Mann-Whitney U
检验。TUFT1高与低/不表达者OS和DFS进行两两比较，采用Kaplan-Meier生存分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

  结果  

　　1、癌组织TUFT1表达的免疫组织化学分析：132例肝癌及癌癌旁组织芯片的免疫组织化学分析结果显示，TUFT1表达主要定位于细胞质和细胞膜，癌旁组TUFT1染色强度显著高于癌旁组。

　　2、TUFT1与HCC患者临床病理特征：肝癌患者中HBsAg阳性为90.9%，按肝癌TUFT1强度分为高表达组(66例)和低/高不表达组(66例)。HBeAg阴性87例中，TUFT1高表达者占43.7%，低表达者占56.3%。

　　HBeAg阳性45例中，TUFT1高表达者占62.2%，低表达者占37.8%，癌组织TUFT1表达与肿瘤大小、血管侵袭、HBeAg及伴有腹水等有关，与患者年龄、性别、AFP等无统计学差异。

　　3、TUFT1对HCC患者的预后价值：HCC患者TUFT1表达与临床预后关系分析，显示TUFT1低表达患者OS为1.9~70.8个月，高表达者OS为0.8~57.9个月，(HR=3.026，P<0.001)。

　　TUFT1高表达分别预示TNM I-II 期的肝癌患者或TNM III-IV
期的肝癌患者(χ²=15.9，P<0.001)较短的DFS，且能预示TNM III-IV
期肝癌患者较短的OS(χ²=4.314，P<0.05)。然而，TUFT1的表达量对TNM III-IV
期患者OS(χ²=3.067，P=3.067)的影响无明显统计学意义。

  讨论  

　　肝癌治疗仍以手术为主，辅以血管栓塞、射频消融、放化疗和生物治疗等，或有效治疗局部病灶，不能解决复发、转移等问题，术后复发率高，预后差，多重激酶抑制剂拉菲尼能延长患者中位生存期，其疗效仍不理想，尽管从牛釉质形成细胞富集的cDNA表达库中鉴别、克隆和测序的TUFT1。

　　在牙釉质的组成、发育和矿化中起中要作用。肝癌中TUFT1异常的作用机制仍不明确，推测TUFT1被缺氧诱导因子诱导，肝癌细胞中TUFT1不与Rab
GAPI 相互作用。

　　而激活mTOR信号通路，肝癌细胞中TUFT1并不影响MAPK信号通路中相关蛋白，另外，多种非编码RNA也参与调控TUFT1的表达。在HCC进展中TUFT1异常表达的确切机制有待探讨。